烟酰胺磷酸核糖转移酶基因编辑对人胚胎干细胞生长影响的研究

王治; 王淑娜; 徐添颖; 李志勇; 张赛龙; 缪朝玉

doi:10.3969/j.issn.1006-0111.2019.03.009

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烟酰胺磷酸核糖转移酶基因编辑对人胚胎干细胞生长影响的研究

王治, 王淑娜, 徐添颖, 李志勇, 张赛龙, 缪朝玉

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王治, 王淑娜, 徐添颖, 李志勇, 张赛龙, 缪朝玉. 烟酰胺磷酸核糖转移酶基因编辑对人胚胎干细胞生长影响的研究[J]. 药学实践与服务, 2019, 37(3): 237-240. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2019.03.009

引用本文:

WANG Zhi, WANG Shuna, XU Tianying, LI Zhiyong, ZHANG Sailong, MIAO Chaoyu. The effect of Nampt gene editing on the growth of human embryonic stem cells[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2019, 37(3): 237-240. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2019.03.009

Citation:

WANG Zhi, WANG Shuna, XU Tianying, LI Zhiyong, ZHANG Sailong, MIAO Chaoyu. The effect of Nampt gene editing on the growth of human embryonic stem cells[J]. Journal of Pharmaceutical Practice and Service, 2019, 37(3): 237-240. doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2019.03.009

烟酰胺磷酸核糖转移酶基因编辑对人胚胎干细胞生长影响的研究

doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2019.03.009

海军军医大学药学院药理学教研室, 上海 200433

基金项目: 军事医学创新工程重点项目（16CXZ009）；国家自然科学基金重点项目（81730098）；上海市科委项目（16431901400,16140904500）

The effect of Nampt gene editing on the growth of human embryonic stem cells

Department of Pharmacology, School of Pharmacy, Naval Medical University, Shanghai 200433, China

摘要: 目的研究烟酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide phosphoribosyl transferase，Nampt）基因在人胚胎干细胞生长中的作用。方法采用CRISPR/Cas9技术对人胚胎干细胞H9细胞系的Nampt基因进行移码突变；随后，筛选Nampt基因突变细胞系进行基因测序，同时在显微镜下观察其生长状态。另外，给予H9细胞不同浓度的Nampt抑制剂FK866进行干预，采用CCK-8试剂盒检测细胞活力。结果 Nampt基因发生突变后，人胚胎干细胞会逐渐死亡。同样，Nampt抑制剂FK866也会抑制胚胎干细胞的活力，使细胞逐渐死亡。结论 Nampt基因对维持人胚胎干细胞生长具有不可或缺的重要作用。
- 烟酰胺磷酸核糖转移酶 /
- 胚胎干细胞 /
- CRISPR/Cas9技术 /
- 基因编辑
Abstract: Objective To study the role of nicotinamide phosphoribosyltransferase(Nampt)gene in the growth of human embryonic stem cells. Methods CRISPR/Cas9 technology was used for Nampt gene knockout in human embryonic stem cells by introducing frame-shift mutation to gene coding region.Then,the mutational cells were screened with gene sequencing and observed for the growth situation under the microscope.In addition,Nampt inhibitor FK866 was introduced at different concentrations to interfere the growth of human embryonic stem cells,followed by the cell viability test with CCK-8 kit. Results Human embryonic stem cells gradually died after the mutation of Nampt gene with CRISPR/Cas9 technology.Likewise,Nampt inhibitor FK866 significantly inhibited the cell viability and gradually led to the death of cells. Conclusion Nampt gene plays an indispensable role in maintaining the growth of human embryonic stem cells.
- Nampt /
- embryonic stem cells /
- CRISPR/Cas9 technology /
- gene editing

[1]	WANG Z,WANG S N,XU T Y,et al.Organoid technology for brain and therapeutics research[J].CNS Neurosci Ther,2017,23(10):771.
[2]	FATEHULLAH A,TAN S H,BARKER N.Organoids as an in vitro model of human development and disease[J].Nat Cell Biol,2016,18(3):246-254.
[3]	HSU P D,LANDER E S,ZHANG F.Development and applications of CRISPR-cas9 for genome engineering[J].Cell,2014,157(6):1262-1278.
[4]	CONG L,ZHANG F.Genome Engineering Using CRISPR-Cas9 System[J].Methods Mol Biol,2015,1239:197.
[5]	BELENKY P,BOGAN K L,BRENNER C.NAD+ metabolism in health and disease[J].Trends Biochem Sci,2007,32(1):12-19.
[6]	WANG P,MIAO C Y.NAMPT as a therapeutic target against stroke[J].Trends Pharmacol Sci,2015,36(12):891-905.
[7]	XU R,YUAN Z,YANG L,et al.Inhibition of NAMPT decreases cell growth and enhances susceptibility to oxidative stress[J].Oncol Rep,2017,38(3):1767-1773..
[8]	YIN H,VAN DER VEER E,FRONTINI M J,et al.Intrinsic directionality of migrating vascular smooth muscle cells is regulated by NAD+ biosynthesis[J].J Cell Sci,2012,125(23):5770-5780.
[9]	VAN DER VEER E,HO C,O'NEIL C,et al.Extension of human cell lifespan by nicotinamide phosphoribosyltransferase[J].J Biol Chem,2007,282(15):10841-10845.
[10]	STEIN L R,IMAI S I.Specific ablation of Nampt in adult neural stem cells recapitulates their functional defects during aging[J].Embo J,2014,33:1321-1340.
[11]	HENG B C.Effect of Rho-associated kinase (ROCK) inhibitor Y-27632 on the post-thaw viability of cryopreserved human bone marrow-derived mesenchymal stem cells[J].Tissue Cell,2009,41(5):376-380.
[12]	GARTEN A,PETZOLD S,KÖRNER A,et al.Nampt:linking NAD biology,metabolism and cancer[J].Trends Endocrinol Metab,2009,20(3):130-138.
[13]	REVOLLO J R,KÖRNER A,MILLS K F,et al.Nampt/PBEF/Visfatin regulates insulin secretion in β cells as a systemic NAD biosynthetic enzyme[J].Cell Metab,2007,6(5):363-375.
[14]	WANG P,DU H,ZHOU C C,et al.Intracellular NAMPT-NAD+-SIRT1 cascade improves post-ischaemic vascular repair by modulating Notch signalling in endothelial progenitors[J].Cardiovasc Res,2014,104(3):477-488.
[15]	WANG P,XU T Y,GUAN Y F,et al.Nicotinamide phosphoribosyltransferase protects against ischemic stroke through SIRT1-dependent adenosine monophosphate-activated kinase pathway[J].Ann Neurol,2011,69(2):360-374.

[1]	刘丽艳, 余小翠, 孙传铎. 纳武利尤单抗治疗非小细胞肺癌有效性及安全性的Meta分析 . 药学实践与服务, 2024, 42(10): 451-456. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202310044
[2]	宋雨桐, 夏德润, 顾珩, 唐少文, 易洪刚, 沃红梅. 帕博利珠单抗与铂类化疗方案在晚期非小细胞肺癌一线治疗中的药物经济学评价 . 药学实践与服务, 2024, 42(8): 334-340. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202303023
[3]	冯志惠, 邓仪卿, 叶冰, 安培, 张宏, 张海军. 雀梅藤石油醚提取物诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的实验研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(6): 253-259. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202311055
[4]	修建平, 杨朝爱, 刘禧澳, 潘乾禹, 韦广旭, 王卫星. 全反式维甲酸对肝星状细胞活化及氧化应激的作用和机制探索 . 药学实践与服务, 2024, 42(7): 291-296. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202312054
[5]	姜涛, 徐卫凡, 蒋益萍, 夏天爽, 辛海量. 巴戟天丸组方对Aβ损伤成骨细胞的作用及基于网络药理学的机制研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(7): 285-290, 296. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202305011
[6]	杨媛媛, 安晓强, 许佳捷, 江键, 梁媛媛. 正极性驻极体联合5-氟尿嘧啶对瘢痕成纤维细胞生长抑制的协同作用 . 药学实践与服务, 2024, 42(6): 244-247. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202310027
[7]	陈静, 何瑞华, 翁月, 徐熠, 刘静, 黄瑾. 基于网络药理学和分子对接技术探究定清片活性成分治疗白血病的作用机制 . 药学实践与服务, 2024, 42(11): 479-486. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202401073
[8]	陈金涛, 乔子婴, 马明华, 张若曦, 王振伟, 年华. 基于网络药理学和分子对接技术研究金芪清疏颗粒治疗社区获得性肺炎的潜在机制 . 药学实践与服务, 2024, 42(11): 471-478. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202312014
[9]	夏哲炜, 曾垣烨, 朱海菲, 李育, 陈啸飞. 核磁共振磷谱法测定磷酸氢钙咀嚼片中药物含量 . 药学实践与服务, 2024, 42(9): 399-401, 406. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202404063
[10]	黄韵, 张正银, 金英, 郑怡菁, 李铁军, 孙莉莉. 耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌及大肠埃希菌临床分离株耐药性及耐药基因分析 . 药学实践与服务, 2024, 42(10): 439-444. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202309059
[11]	王雪莲, 郑斯莉, 李志勇, 罗亨宇, 缪朝玉. 全身过表达人METRNL基因小鼠模型的构建与验证 . 药学实践与服务, 2024, 42(5): 198-202, 222. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202311014
[12]	姚瑞阳, 于海征, 李耀盺, 张磊. 丹参FBXL 基因家族的鉴定和表达模式分析 . 药学实践与服务, 2024, 42(11): 461-470. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202407034
[13]	迟文雅, 袁艳, 李伟林, 吴茼妤, 俞媛. 负载骨髓间充质干细胞/白藜芦醇脂质体的水凝胶支架用于创伤性脑损伤治疗 . 药学实践与服务, 2024, 42(): 1-8. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202406034
[14]	桂明珠, 李静, 李志玲. 儿童伏立康唑的血药浓度与CYP2C19、CYP2C9和CYP3A5基因多态性的相关性研究 . 药学实践与服务, 2024, 42(): 1-5. doi: 10.12206/j.issn.2097-2024.202402020

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烟酰胺磷酸核糖转移酶基因编辑对人胚胎干细胞生长影响的研究

doi: 10.3969/j.issn.1006-0111.2019.03.009

海军军医大学药学院药理学教研室, 上海 200433

基金项目: 军事医学创新工程重点项目（16CXZ009）；国家自然科学基金重点项目（81730098）；上海市科委项目（16431901400,16140904500）

收稿日期: 2018-12-05
修回日期: 2019-04-04

关键词:

摘要: 目的研究烟酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide phosphoribosyl transferase，Nampt）基因在人胚胎干细胞生长中的作用。方法采用CRISPR/Cas9技术对人胚胎干细胞H9细胞系的Nampt基因进行移码突变；随后，筛选Nampt基因突变细胞系进行基因测序，同时在显微镜下观察其生长状态。另外，给予H9细胞不同浓度的Nampt抑制剂FK866进行干预，采用CCK-8试剂盒检测细胞活力。结果 Nampt基因发生突变后，人胚胎干细胞会逐渐死亡。同样，Nampt抑制剂FK866也会抑制胚胎干细胞的活力，使细胞逐渐死亡。结论 Nampt基因对维持人胚胎干细胞生长具有不可或缺的重要作用。